一、wyatt多角度激光光散射儀測(cè)試前準(zhǔn)備
溶劑準(zhǔn)備
水相體系：使用超純水或配制鹽溶液(約1L)，加入0.02% NaN?抑菌劑，用0.22μm濾膜過濾。
有機(jī)相體系：采用HPLC級(jí)溶劑，同樣用0.22μm濾膜過濾(進(jìn)口試劑根據(jù)實(shí)際情況處理)。
樣品準(zhǔn)備
根據(jù)分子量范圍配制濃度(定量環(huán)100μL)：
分子量~1000kDa：0.5-1mg/mL
分子量~100kDa：1-2mg/mL
分子量~10kDa：3-5mg/mL
分子量~5kDa：5-10mg/mL
樣品需用0.22μm或0.45μm濾膜過濾，或通過離心處理去除雜質(zhì)，盡可能使用流動(dòng)相配制。
儀器檢查
確認(rèn)電源線連接、電源開關(guān)及交換機(jī)(適用于網(wǎng)線信號(hào)連接)已開啟。
二、儀器開機(jī)與平衡
開機(jī)順序
依次打開泵、柱溫箱(設(shè)定溫度)、進(jìn)樣系統(tǒng)(手動(dòng)/自動(dòng)進(jìn)樣器)、示差或紫外檢測(cè)器、粘度檢測(cè)器、多角度激光光散射檢測(cè)器電源及計(jì)算機(jī)。
系統(tǒng)沖洗與平衡
開啟泵，用超純水沖洗系統(tǒng)約5分鐘(purge泵)，關(guān)閉purge閥。
使用最新配制的流動(dòng)相沖洗系統(tǒng)(有機(jī)體系直接使用流動(dòng)相)。
調(diào)節(jié)流速至0.1mL/min(若接入粘度檢測(cè)器，需待其進(jìn)入工作界面后再開啟泵，且IP & DP處于purge on狀態(tài))。
若系統(tǒng)中未接入GPC/SEC柱，可直接將流速調(diào)至0.1-1.0mL/min(無粘度檢測(cè)器時(shí)，示差檢測(cè)器purge閥需處于“Purge On”狀態(tài))。
若系統(tǒng)中已接入GPC/SEC柱，需以0.1mL/min為起始流速，每1-2分鐘提高0.1mL，將流速調(diào)整至0.4-0.5mL/min，充分平衡系統(tǒng)。
平衡時(shí)間：水相體系建議提前一天沖洗和平衡，第二天開始試驗(yàn)；有機(jī)相體系平衡時(shí)間一般為3-12小時(shí)。
三、測(cè)試操作與數(shù)據(jù)采集
系統(tǒng)平衡與基線穩(wěn)定
待系統(tǒng)充分平衡后，逐步調(diào)整流速至試驗(yàn)流速。
調(diào)節(jié)示差檢測(cè)器的Purge閥至“Purge Off”狀態(tài)，待信號(hào)穩(wěn)定后歸零(Zero)。
粘度計(jì)(Visco Star)操作方法見附件，待基線穩(wěn)定。
調(diào)用試驗(yàn)?zāi)０?br />
在Astra軟件中調(diào)用相應(yīng)的試驗(yàn)?zāi)０?推薦使用安裝工程師創(chuàng)建的Template/Method)。
單針進(jìn)樣：File → New → Experiment from Template/Method → My Templates/methods，選擇相應(yīng)試驗(yàn)?zāi)０濉?br />
自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣：File → New → sample set Template/blank sequence → My Templates/method，選擇相應(yīng)試驗(yàn)?zāi)０濉?br />
進(jìn)樣與數(shù)據(jù)采集
將進(jìn)樣閥由“load”轉(zhuǎn)至“inject”狀態(tài)，通過進(jìn)樣系統(tǒng)進(jìn)樣。
Astra軟件自動(dòng)開始采集數(shù)據(jù)，數(shù)據(jù)采集完成后，軟件根據(jù)設(shè)定時(shí)間停止，或手動(dòng)停止(Experiment → Stop)。
數(shù)據(jù)保存
數(shù)據(jù)采集完成后，依次點(diǎn)擊File → Save as...，命名文件并保存。
四、wyatt多角度激光光散射儀數(shù)據(jù)處理與報(bào)告查看
數(shù)據(jù)處理流程
基線調(diào)整：雙擊Baseline，勾選LS 11(90°角)，調(diào)整基線端點(diǎn)，保證基線水平，點(diǎn)擊OK/Apply保存。
定峰：移動(dòng)鼠標(biāo)至峰的起始點(diǎn)，按住左鍵拖至峰的落點(diǎn)，松開左鍵定義峰區(qū)域，微調(diào)峰區(qū)域邊緣，點(diǎn)擊OK/Apply保存。
dn/dc值輸入與歸一化：輸入dn/dc值并選擇normalise(若模板中已使用<50kDa標(biāo)準(zhǔn)樣品如BSA、dextran在該體系下歸一化，則無需重復(fù)操作)。
查看報(bào)告：完成上述步驟后，查看報(bào)告獲取測(cè)試結(jié)果。
儀器校正(定期進(jìn)行)
延遲體積校正：校正各檢測(cè)器間管路體積，確保峰尖位置對(duì)齊，通常由安裝工程師完成，結(jié)果保存于Astra軟件模板中。
90°角信號(hào)校正(甲苯校正)：獲取90°角散射光強(qiáng)度值與電壓值的校正系數(shù)，推薦每年或每半年一次。
十八角度歸一化校正：以90°角為基準(zhǔn)，校準(zhǔn)其他17個(gè)檢測(cè)器，使用Rg<10nm的標(biāo)準(zhǔn)品(如30kDa的右旋糖酐Dextran或牛血清白蛋白BSA)進(jìn)行校正。
